Maxam-Gilbert法

Maxam-Gilbert法

Maxam-Gilbert法又称化学断裂法,是DNA测序的两种主要技术之一,适用于双链和单链DNA分析。该方法通过碱基专一性化学试剂(如硫酸二甲酯、肼)对末端放射性标记的DNA进行部分降解,产生不同长度的寡核苷酸片段,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后形成可读序列带谱,直接确定250个核苷酸以内的碱基排列顺序 。

该方法包含碱基修饰(如鸟嘌呤甲基化、嘧啶环裂解)和哌啶介导的磷酸二酯键断裂两个关键步骤,生成4组末端标记的DNA片段组。通过比较G、G+A、T+C和C四组反应产物的电泳带谱,结合特异性化学反应的阶梯式分布特征解析原始序列结构 。

该技术由Maxam和Gilbert于1977年建立,与Sanger的酶法同为DNA测序技术突破性进展。后续改进中,M13单链噬菌体克隆技术提升了测序效率。尽管Sanger法因操作简便成为主流,Maxam-Gilbert法在分析DNA二级结构及蛋白质-DNA相互作用领域仍具应用价值 。

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