基因文库是通过将生物基因组DNA切割后与载体连接，导入受体菌群储存形成的克隆集合体，每个克隆包含该生物的不同基因。文库分为基因组文库和cDNA文库两类：前者涵盖全部基因信息，常用λ噬菌体或粘性质粒作为载体；后者基于mRNA反转录构建，不含内含子序列。该技术于20世纪70年代应用于大肠杆菌、果蝇等生物研究，构建时需通过Clark-Carbon公式计算克隆总数，如人类基因组需约69万个克隆 。
中国在21世纪启动人口健康基因检测工程，计划建立1000个授权检测站。构建程序包括DNA片段制备、载体连接及重组体导入宿主细胞，筛选方法涵盖核酸杂交、PCR扩增和免疫筛选。基因文库用于基因分离、定位及发育调控研究，通过RACE技术可扩增cDNA末端序列，支持血红蛋白基因连锁分析等应用 。
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